Immunologie : méthode de détection des anticorps - Compte rendu de TP

Thèmes abordés

Immunologie, agglutination, immuno-hématologie, antigène, anticorps, immuno-agglutination, sérogroupage, immuno-précipitation, immunoélectrophorèse, immunomarquage, méthode ELISA Enzyme Linked Immuno-Sorbent Assay, immunocapture, sérothérapie, réaction immunologique

Résumé du document

Les réactions Ag-Ac (antigène-anticorps) sont des réactions réversibles et spécifiques. Cette réaction immunologique met en présence une préparation antigénique et l'immun-sérum correspondant, entraînant la formation d'un complexe immun Ag-Ac. Cette formation peut être directement visible, par la formation d'un réseau tridimensionnel : l'agglutinat. Nous nous intéresserons donc aux techniques d'immuno-agglutination. Ces réactions mettent en jeu des Ag particulaires qui ont la particularité de sédimenter et former des particules insolubles visibles à l'oeil nu. Les anticorps généralement utilisés pour ces techniques sont les IgM (immunoglobulines µ) à cause de leur forme (pentamère) et donc de leur valence pratique élevée (5).

Extraits

[...] Tableau récapitulatif des résultats obtenus : Épreuve globulaire Épreuve sérique Groupe Numéro de prélèvement sanguin anti-A anti-B anti-A+B A B O 6 A 2 B 0 O 8 AB - B 1 O Interprétation : Épreuve globulaire : Si l'on remarque une agglutination c'est qu'il y a eu formation d'un complexe immun : L'anticorps a reconnu l'antigène. S'il est reconnu c'est que l'antigène est présent. Épreuve sérique : Si l'on remarque une agglutination c'est qu'il y a eu la formation d'un complexe immun : L'antigène a reconnu l'anticorps. S'il est reconnu c'est que l'anticorps est présent. II. Les techniques d'immuno-précipitation Principe général et variantes Contrairement aux réactions d'immuno-agglutination, les techniques d'immuno-précipitation utilisent des Ag solubles qui réagissent avec des Ac bivalent pour former un « réseau macromoléculaire de grande taille », qui aura tendance à précipiter. [...]

[...] le principe est toujours le même : mise en contact d'Ac avec des Ag en proportion convenable, faisant apparaître un précipité blanchâtre si réaction. La technique de Laurell est une variante de celle de Mancini. Il a adapté la méthode en y ajoutant un courant électrique afin d'obtenir des résultats plus rapidement. Ainsi l'antigène migre par application d'un courant électrique et des arcs de précipitation se forment, apparaissant en « rockets ». La hauteur de ces « rockets » est proportionnelle à la quantité d'Ag. [...]

[...] Cette technique permet de doser la concentration en IgG dans le sérum (grâce aux mesures des disques de précipitation). Puit 1 : c(BSA)=0,1 g/L ; Puit 2 : c(BSA)=0,2 g/L ; Puit 3 : c(BSA)=0,4 g/L ; Puit 4 : c(BSA)=0,5 g/L ; Puit 5 : ? 10 µL de solution étalon (BSA) sont déposées dans chacun des puits. L'inconvénient de cette méthode est le temps de réaction (allant de 48h à plusieurs jours pour y observer clairement des anneaux de précipitation). Résultats obtenus après 5 jours d'incubation à température ambiante : Seule une des deux boîtes réalisées montre des résultats positifs : Puit 1 : 0 cm ; Puit 2 : 0,6 ; Puit 3 : 1,1 cm ; Puit 4 : 1,0 cm ; Puit 5 : 0,6 cm INTERPRÉTATION : D'après le graphique, on peut déduire que la concentration en BSA dans le puit 5 de diamètre 0,6 cm, est de 0,2 g/L. La technique de Mancini est donc bien un moyen de doser les anticorps, c'est une technique fiable et assurant des résultats. [...]

[...] On les compare à un témoin normal. Si les arcs sont symétriques, on peut en déduire qu'il n'y a pas d'anomalie chez le patient. Dans le cas où les arcs de précipitation de sont pas symétriques, et selon leur emplacement, on peut diagnostiquer une ou plusieurs pathologies. Résultat de l'IEP : On constate que les arcs sont symétriques entre le contrôle et le patient. Tout est normal. Dans le cas où il y aurait des anomalies (en général des asymétries sur les chaînes G et les arcs sont décalés et/ou plus épais que le contrôle. [...]

[...] Le complexe Ag-Ac formé bloque alors la migration d'où la formation d'arcs de précipitation. On dépose donc 15 µL d'anticorps anti-BSA (anti-sérum albumine) dans les différents puits (Ac dans le puit central) puis incubation à température ambiante pendant 2 à 5 jours. Puit 1 : Témoin Puit 2 : Bovin ; Puit 3 : Lapin ; Puit 4 : Porc ; Puit 5 : Cheval ; Puit 6 : anticorps anti-BSA Résultats obtenus après 5 jours d'incubation à température ambiante : Idem ici, seule une des deux boîtes présente des résultats (positifs) : On remarque un arc de précipitation entre le puit central contenant les anticorps anti-BSA et le puit 2 contenant le sérum complet de bovin. [...]