Biologie moléculaire - publié le 14/03/2023

Thèmes abordés

échantillons d'ADN, test ADN, enzyme de restriction, biologie, ADN plasmidique, purification d'ADN, sens de l'ADNc, méthode PCR

Résumé du document

But principal : Purifier un ADN plasmidique, le polymériser par PCR et vérifier le clonage d'un ADNc dans un vecteur d'expression par digestion grâce à une enzyme de restriction.
Principes généraux : Utilisation de différentes techniques de biologie moléculaire afin de répondre à une problématique. Ici, nous utiliserons ces techniques dans le but de purifier de l'ADN plasmidique, définir s'il contient un ADNc par PCR et déterminer le sens de l'ADNc grâce à une enzyme de restriction.

Extraits

[...] Les ADN C n'ont aucune bande. Conclusion : Une erreur de manipulation n'a pas pu permettre l'interprétation de nos résultats, cependant les résultats observés à l'aide du groupe A2 nous a permis de conclure que les ADN A et les ADN B possède l'insert permettant la lecture des amorces alors que l'ADN C non. III) TP3 : Vérification d'un clonage d'un ADNc dans un vecteur d'expression par digestion avec une enzyme de restriction But : Détermination du sens d'insertion de l'ADNc Principe : Vérification du clonage de l'ADNc par une enzyme de restriction. [...]

[...] Lorsque l'on compare les poids moléculaires des plasmides A et B on observe que l'insert du plasmide A est plus grand que celui du plasmide B. En additionnant cette hypothèse avec les résultats on peut affirmer que le plasmide A possède l'insert anti-sens, l'insert anti-sens étant plus long (donc migrera plus loin) que l'insert sens. Lors de nos prévisions, l'insert anti-sens était d'environ 700 pb, ici on observe une bande de migration pour les plasmides B d'environ 700 pb. On peut donc en déduire que le plasmide B contient l'insert sens. [...]

[...] Résultats : Discussion : Les sept premiers puits contiennent un ADN contenant un plasmide A ou il y aurait donc dû avoir une bande, or nous n'en observons pas. Les derniers puits contenaient un ADN plasmidique C. Aucun résultat n'est apparu. Il y a dû avoir une erreur de manipulation. Elle peut être individuelle ou collective, par exemple le milieu réactionnel à peut être mal effectué. Afin de pouvoir discuter et interpréter les résultats nous allons prendre les résultats du groupe A2. [...]

[...] Principes généraux : Utilisation de différentes techniques de biologie moléculaire afin de répondre à une problématique. Ici nous utiliserons ces techniques afin de purifier de l'ADN plasmidique, définir s'il contient un ADNc par PCR et déterminer le sens de l'ADNc grâce à une enzyme de restriction. TP1 : Purification d'un ADN plasmidique à partir d'une mini culture bactérienne But : Purification d'un ADN plasmidique Principe : purification d'un ADN plasmidique d'une petite culture bactérienne grâce à l'utilisation d'une colonne d'affinité. [...]

[...] Il possède 6 bandes et un insert. La dernière carte possède l'insert sens, il possède également 6 bandes et un insert. Nous allons utiliser dans cette séance une enzyme de restriction afin de déterminer si le vecteur présent dans le plasmide est dans le bon sens ou dans l'anti-sens. C'est une enzyme spécifique permettant la reconnaissance d'une séquence de nucléotide, qui correspond au site de restriction qui va ensuite être couper par l'enzyme. Résultats : Discussion : On observe pour le plasmide A 3 bandes visibles. [...]